魷魚(yú)干選用新鮮魷魚(yú)經(jīng)剖腹、去內(nèi)臟和眼球、干燥、整形加工晾曬而成, 其產(chǎn)品新鮮或腐敗一般通過(guò)測(cè)定產(chǎn)品中揮發(fā)性鹽基氮(TVBN)的高低來(lái)判斷, 而我國(guó)現(xiàn)行的魷魚(yú)干標(biāo)準(zhǔn)中尚未規(guī)定 TVBN 的標(biāo)準(zhǔn)及檢測(cè)方法[ 1] 。 國(guó)標(biāo)分析法[ 2] 對(duì) TVBN 的測(cè)定是采用半微量定氮法或微量擴(kuò)散法, 方法繁瑣費(fèi)時(shí)。 我們?cè)谧詣?dòng)凱氏定氮儀測(cè)定蛋白質(zhì)的基礎(chǔ)上, 摸索出一套自動(dòng)蒸餾、吸收、滴定及計(jì)算的新方法。 方法簡(jiǎn)便、快速、準(zhǔn)確、可靠, 適用于大批量樣品的檢測(cè) , 介紹如下:

1 實(shí)驗(yàn)部分

1.1 儀器與試劑 ① 2300 Kjeltec Auto Analy zer Unit , 瑞典福斯特卡托公司產(chǎn)品, 帶 750 ml 蒸餾管;② 氧化鎂及氧化鎂懸浮液(10 g/ L);③ 含溴甲酚綠和甲基紅指示劑的 1%硼酸吸收液:稱(chēng)取 100 g 硼酸溶于 10 L 純水中, 添加 1 g/ L 的溴甲酚綠乙醇溶液 100 ml 和 1 g/ L 甲基紅乙醇溶液 70 ml ;④ 鹽酸標(biāo)準(zhǔn)溶液0.1 mol/ L。

1.2 測(cè)定方法

1.2.1 樣品處理 準(zhǔn)確稱(chēng)取剪碎的魷魚(yú)干 20 g 于錐形瓶中,加入 100 ml 純水, 振蕩器振搖 30 min 后過(guò)濾備測(cè)。

1.2.2 儀器操作條件 吸收液加入量 30 ml ;加水量 50 ml ;加堿量 0 ;模式 SafE;時(shí)間 2 s ;蒸餾體積;結(jié)果報(bào)告單位 mgN/100 g。

1.2.3 測(cè)定 準(zhǔn)確吸取 10 ml 樣品濾液(視 TVBN 含量而定)于 750 ml 蒸餾管中, 加入10 ml 氧化鎂懸浮液, 迅速放進(jìn)自動(dòng)定氮儀蒸餾器上, 關(guān)上安全門(mén), 儀器自動(dòng)蒸餾、吸收、滴定、計(jì)算。同時(shí)添加同樣氧化鎂做空白實(shí)驗(yàn)。

2 結(jié)果與討論

2.1 儀器操作參數(shù)條件的選擇 本方法的測(cè)定原理與半微量定氮法相同, 是利用堿性條件蒸出樣液中氨及胺類(lèi)等揮發(fā)性堿性含氮物, 用標(biāo)準(zhǔn)酸溶液滴定。 考慮到樣品 TVBN 含量不同而選擇體積模式進(jìn)行蒸餾滴定。 在樣液及氧化鎂加入量不變的前提下, 不同的加水量對(duì)測(cè)定結(jié)果的影響見(jiàn)表 1。 結(jié)果表明, 加水量的多少對(duì)檢測(cè)結(jié)果沒(méi)有明顯影響。 因?qū)嶒?yàn)采用 750 ml 大蒸餾管, 測(cè)定時(shí)選擇加水量為 50 ml。 考慮到該儀器有自動(dòng)計(jì)算功能, 結(jié)果報(bào)告單位直接選擇 mgN/ 100 g。

2.2 實(shí)驗(yàn)操作的影響 實(shí)驗(yàn)中發(fā)現(xiàn), 樣液加入氧化鎂后應(yīng)立即測(cè)定, 否則會(huì)使測(cè)定結(jié)果偏低, 且有隨著放置時(shí)間的延長(zhǎng)結(jié)果更低的趨勢(shì)。 這可能是添加氧化鎂使樣液中的銨類(lèi)物質(zhì)轉(zhuǎn)化為氨而揮出。

2.3 加標(biāo)回收實(shí)驗(yàn) TVBN 所測(cè)定的是動(dòng)物食品中的蛋白質(zhì)在腐敗過(guò)程中經(jīng)分解所產(chǎn)生的氨及胺類(lèi)等堿性含氮物, 所以本實(shí)驗(yàn)將硫酸銨作為檢驗(yàn)蒸餾器回收率的標(biāo)準(zhǔn)試劑進(jìn)行加標(biāo)回收實(shí)驗(yàn), 其回收率在 98.6%～ 101.2 %, 符合檢測(cè)要求(表 2)。

2.4 精密度實(shí)驗(yàn) 取不同的魷魚(yú)干樣品, 分別平行測(cè)定 6 次,測(cè)定結(jié)果的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差分別為 1.69%和 1.27%(表 3), 儀器測(cè)定方法的精密度滿(mǎn)足分析要求。

2.5 不同方法的對(duì)比 對(duì)同一樣品, 分別采用本方法與 GB/ T5009.44-1996 規(guī)定的半微量定氮法測(cè)定 TVBN 含量。 結(jié)果表明, 兩種方法對(duì)同一樣品的測(cè)定結(jié)果無(wú)顯著性差異(表 4)。

2.6 不同樣品預(yù)處理方法的比較 根據(jù)福斯特卡托公司提供的應(yīng)用簡(jiǎn)報(bào)[ 3]

, 將樣品粉碎后直接取 1 ～ 5 g 放入蒸餾管, 加入0.5 g 氧化鎂固體, 按前述儀器操作條件直接測(cè)定 TVBN 含量,結(jié)果見(jiàn)表 5 。 與表 3 結(jié)果相比, 直接測(cè)定的結(jié)果略低于提取物的測(cè)定值。 分析發(fā)現(xiàn)我們未采用應(yīng)用報(bào)告中 1095 刀式磨粉碎樣品, 使樣品的粉碎程度和均勻性不夠。 因此, 直接法測(cè)定的前提是樣品充分粉碎均勻。

3 小結(jié)

采用自動(dòng)定氮儀測(cè)定魷魚(yú)干中的揮發(fā)性鹽基氮, 精密度高、準(zhǔn)確性好、回收率高。 只要樣品充分粉碎均勻可直接測(cè)定, 具有操作簡(jiǎn)便、分析速度快、自動(dòng)化程度高的特點(diǎn), 測(cè)定 1 份樣品平均需 5 min , 適于大批量樣品的測(cè)定, 并可推廣到魚(yú)肉類(lèi)揮發(fā)性鹽基氮的測(cè)定。